玉米醇溶蛋白检测方法研究【库百科养殖网】

玉米醇溶蛋白检测方法研究

刘振宇，徐佳璐

（哈尔滨国家粮油质量检测中心，黑龙江哈尔滨150070）

文献标识码：A

文章编号：2090-9737(2016)07-0021-01

作者简介：刘振宁（1987　-），男，山东莱芜人，本科，助理工程师，主要从事粮油检验方面工作。

1　方法原理

将样品粉碎至所需细度后，经过脱脂，用有机溶剂萃取，之后测定其吸光度，与标准曲线比较的出醇溶蛋白含量。再通过回收率试验等，评价其检验结果准确性。

2　仪器与材料

主要仪器设备：磁力加热搅拌器；紫外可见分光光度计；涡旋混合器。perten3100锤式旋风磨、数显电热恒温干燥箱、JA-　203N千分之一电子天平；可调速离心机、HY4调速多用振荡器等。

试剂及配制：100%丙酮；玉米醇溶蛋白标准样品；100%异丙醇；2-巯基乙醇；三氯乙酸（试验中所有未特殊说明的试剂均为分析纯）。含0.　6%2-　巯基乙醇55.　0%异丙醇溶液配制：将2　巯基乙醇3mL及异丙醇275mL依次加入到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容，充分混匀后静置待用。三氯乙酸溶液(0.　15mol/L)配制：将三氯乙酸12.　5g加入到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容，充分混匀后静置待用。

样品选择：8个品种的玉米属于马齿型或半马齿型，分别为：先玉335、龙丹48，样品由哈尔滨市粮食研究所提供。玉米中的DM、CP含量测定依据《饲料分析及饲料质量检测技术》[养殖网:www.novmv.com/]。

3　实验方法

样品准备：将除杂后的玉米样品分别置于数显电热鼓风干燥箱内，在50℃下干燥24h。接着将干燥并冷却后的样品分别用锤式旋风磨进行粉碎，最后通过60目筛，通过率90%以上。将粉碎后的样品再次置于数显电热鼓风干燥箱内，设定温度为105℃，继续干燥3h，冷却备用。

脱脂：准确称取1．OOOg玉米样品，移人150mL锥形瓶中，加入丙酮（分析纯）20mL，在磁力搅拌器上进行混匀1h。称量干燥过的中12.　5cm定量滤纸的质量ml，记录数据（精确至0．OO1g），将已知质量的滤纸折叠后置于布氏漏斗上对丙酮与玉米粉混合物进行过滤，用少量丙酮反复冲洗3～4次直至洗净。将滤纸置于烘箱中于50℃下烘干24h。冷却后称重记录滤纸及干物质的质量m2．精确到0．001g。计算脱脂后干物质的质量(mO):mO=m2-ml。

提取：用分析天平分别准确称取0.　200g脱脂后样品。置于50　mL离心管中，向其中加入配置好的醇溶液各20mL，置于磁力搅拌器上充分混匀后，置于离心机上离心15min，移取上层清液0.　5mL，加入到配置好的三氯乙酸溶液5.5mL的10mL圆底玻璃试管内，混匀，静置30min进行比色。

标准曲线绘制：分别吸取0.5　mL浓度为0ug／L，Oug／L、0.05ug／L、0.　25/ug/L、0.35ug／L、0.45ug／L、0.65ug／L、0.　75ug／L、0．85ug／L)玉米醇溶蛋白标准溶液，配置好的三氯乙酸溶液5．5mL的10mL比色皿内，旋涡混匀后静置30min，在波长为440nm处测定吸光度。以玉米醇溶蛋白的标准含量(ug／L)为纵坐标，以吸光度数值为横坐标绘制标准曲线。

稳定性实验：准确移取醇溶蛋白标准样品(0.　650ug／L)和先玉335号样品，测定吸光度，静置20min、30min、40min、50min、60min后各测定一次吸光度。所测结果的相对标准偏差分别为2.056%和2.133%，说明该实验在th内稳定性良好。

回收试验：准确称取醇溶蛋白标准样品，配制成浓度为1．00ug／L)的标准储备液。实验时将其梯度稀释至0.　1ug／mL，O.　2ug／mL，0.3ug／mL，0.4ug／mL，0.5ug／mL，0.　6ug／mL，0.　7ug／mL，0.8ug／mL，0.9ug／mL以及1.0　ug／mL的标准溶液。分别测定其吸光度，将所有的结果进行线性回归计算，纵坐标为峰面积，横坐标为浓度，计算出线性关系，同时得到相关系数。

向做好前处理好的十份龙丹48样品A-J中依次加入0.5　mL十个梯度浓度的标准溶液，添加水平从小到大依次为0．01-　1ug/g。梯度为0．01ug/g。混匀后充分沉降30　min，在同一条件下重复上述步骤进行吸光度的检测。最后选取浓度为0.　5ug/L和1．Oug／L的标准溶液进行回收率实验，进行六次重复操作，计算分析方法的实用性。

经过计算所得，玉米醇溶蛋白的回归线性方程为：Y=12683.　12x-　126.　38，其线性范围为0.0325　-0.96ug/L，线性相关系数为0.　9984，能够满足定量检测的要求。

而十组不同添加水平的玉米醇溶蛋白加标回收率及相对标准偏差分别是：样品A回收率是82.　44%，相对标准偏差是2.26%；样品B回收率是89.　32%，相对标准偏差是3.36%；样品C回收率是91.　29%，相对标准偏差是4.22%；样品D回收率是88.　45%，相对标准偏差是2.93%；样品E回收率是87.　16%，相对标准偏差是3.13%；样品F回收率是89.　96%，相对标准偏差是8.73%；样品G回收率是90.　58%，相对标准偏差是6.24%；样品H回收率是80.55%，相对标准偏差是6.17%；样品I回收率是92.43%，相对标准偏差是2.32%；样品J回收率是81.　64%，相对标准偏差是5.12%。

经计算，十次梯度添加玉米醇溶蛋白标样的实验回收率为80.　55%～92.43%，相对标准偏差为2.26%～8.73%，由此可以判定，该方法的精密度和准确性符合分析要求。