犊牛腹泻病中细菌的分离鉴定与药敏试验【库百科养殖网】

犊牛腹泻病中细菌的分离鉴定与药敏试验

犊牛腹泻是一种常见的犊牛病症、引起犊牛腹泻得病因有多方面，有管理因素（喂初乳过晚，喂犊牛的奶温过低，喂奶不经稀释直接喂牛犊，喂奶没有定量，环境以及气温突变）。根据对洛阳地区牛场的调查，在排除其它病因后，对腹泻犊牛进行细菌的分离与鉴定，并做了药敏试验，以便挑出敏感药物，进行针对性治疗。菌株分别取自白马寺、升升乳业、洛宁王村、偃师、伊川高山等地养殖场犊经过病原菌的分离鉴定，发现有一头牛是大肠杆菌和沙门氏菌的混合感染，其它七头为大肠杆菌感染，有两头为非细菌性感染。分析的原因有两点：一，由于养殖户的知识有限，他们不能科学合理的使用抗生素；二，由于细菌本身发生了变化，特别是它们能够获取其它耐药菌株的耐药基因。一、大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌是肠杆菌科中一组革兰氏阴性，无芽胞，除少数例外为周身鞭毛，能运动，兼性厌氧，发酵葡萄糖，分解乳糖的细菌。本菌是一切温血动物肠道后段常在菌。肉食兽与杂食兽肠道中携带本菌的数量，远比草食动物多。部分菌株具有致病性和条件致病性，引起肠道疾病或肠道外感染。大肠埃希氏菌大小为1.1-1.5×2.0-6.0，两端钝圆，有的近似球杆状，不行成芽孢，有鞭毛，运动或不运动，多数菌株有荚膜或微荚膜。一些菌株的菌体表面有一层具有黏附性的纤毛，黏附性纤毛是一种毒力因子。1.犊牛腹泻病近年来，随着奶牛业的快速发展，犊牛腹泻病已经成为关系到奶牛业兴衰的一种疾病，犊牛腹泻指的是正在吃奶的小牛出现腹泻的一种病症，一般在出生一个月内发病最高，多侵害出生后两周内的犊牛，一年四季均可发生，本病是造成犊牛生长发育不良和死亡的主要疾病之一，是新生犊牛的杀手，约占犊牛发病率的80% [1]。2.犊牛腹泻病的危害洛阳地区的牛厂为洛阳市民和周边人民提供优质的牛肉和牛奶，犊牛的健康率和成活率直接影响着人民的健康和农民的增收，这段时间犊牛的腹泻发生率明显上升，给养殖户带来了很大的经济损失，本文旨在确定发病原因，测定分离细菌对药物的敏感性，筛选出敏感的抗菌药物，从而为洛阳地区的犊牛腹泻病的有效防治提供科学的依据。3.犊牛腹泻病的主要病因目前知道引起腹泻的病因是多方面的，有管理因素（喂初乳过晚，喂犊牛的奶温过低，喂奶不经稀释直接喂牛犊，喂奶没有定量，环境以及气温突变）。有生物性因素（细菌性因素，包括大肠杆菌和沙门氏菌等等），寄生虫因素有绦虫、蛔虫、球虫；还有营养性因素，Va缺乏引起下痢。但是，总体来说在生物因素引起的犊牛腹泻在临床上占的比重相对较大。二、临床表现精神沉郁，食欲减退或废，全身被毛粗乱，腹部紧缩，尾根及后驱被粪便污染，排稀便。长期腹泻者，两侧肋部凹陷，极度消瘦，步态蹒跚，起立困难，脱水，粪便成水样，腥臭，有时附加黏液或血液。三、诊断诊断原则：根据流行病学，临床症状和剖检变化可做出初步判断；确诊需要实验室检查，用实验室病原检查方法，在排除其它病原感染（病毒、细菌、寄生虫等）经鉴定为致病性大肠杆菌，也可认为是原发性大肠杆菌，在其它原发性疾病中分离出大肠杆菌时，应视为继发性大肠杆菌。四、预防引起大肠杆菌的因素很多，比较复杂，大量临床资料表明：环境因素不良、饲养管理不善、混合感染是当前大肠杆菌病流行的重要因素，因此，需要采取综合性的措施。五、治疗大肠杆菌主要经消化道感染[www.613935.com]，而且耐药菌株广泛存在，所以针对性的选折一种吸收好，无耐药性的抗菌素是确保治疗效果的关键。目前较为简单和有效的药物筛选程序如下：从牛的粪便中分离致病大肠杆菌，进行增殖培养；选着多种吸收率高 的抗菌素制备药敏片；利用分离的大肠杆菌进行药敏试验，选出抗菌性最高的一种或多种药物，进行单个投药试验，确定最佳治疗药物和方案，选择合适的用药途径投药。药酶抑制剂是目前解决耐药性大肠感染的有效途径，在做积极的临床药物筛选的同时，适宜的选择含有药酶抑制剂产品可以发挥事半功倍的作用。[9]六、结果与分析1.病犊牛症状精神委靡，食欲废绝，体温高达39. 5℃-40.5℃，全身被毛粗乱，腰拱起，走路摇摆，腹部紧缩，尿量减少，肛门外翻，周围粪便污染，排稀便，灰白色，腥臭。2.致病性试验结果把分离菌的肉汤培养物腹腔接种给小白鼠，分十组，每组两只小白鼠，接种A1A2C1的三组小鼠共6只，在24小时内死亡；接种B3aE1E2的三组小鼠共6只在72小时内死亡；接种D1D2的二组小鼠共4只，在72小时后死亡；接种B1B2的二组小鼠没有死亡。对照组小鼠则安全无恙。无菌采取病死小鼠的心、血、脾肝进行细菌分离鉴定，涂片、镜检，可见革兰氏阴性的杆菌。接种腹水的营养琼脂培养基上 ，生长的菌落形态基本符合大肠杆菌的形态特征。说明从腹泻犊牛的粪便中分离的大肠杆菌为致病性大肠杆菌。3.药敏试验将分离的大肠杆菌，经麦氏比浊法确定1毫升菌液中含有3亿个杆菌。取菌液0.3毫升（相当于一亿个杆菌）均匀涂布与平板上，用镊子将药敏片平放在平板上，并轻压，使其紧贴在平皿表面，37℃培养18小时，观察结果。七、讨论通过对不同地区采集的五个牛场的10头腹泻犊牛粪便进行细菌分鉴定，得到了十株疑似大肠杆菌和一株疑似沙门氏菌，经形态特征、染色特征、培养特征、生化鉴定等综合分析，确定分离菌株为大肠杆菌和沙门氏菌。致病性结果表明：强致病性大肠杆菌毒株有3株，中等毒力有3株，低致病性毒力菌株有2株，分别占分离菌株数的30%、30%和20%。另有两株为非致病性大肠杆菌，这两头牛也许是病毒感染或寄生虫等非细菌性感染，由于时间和目的的要求，没有做进一步的试验。