水产品中氯霉素类药物残留检测的衍生化条件【库百科养殖网】

水产品中氯霉素类药物残留检测的衍生化条件

氯霉素是一类具有广谱抗菌作用的抗生素类药物，应用在水产上可防治烂鳃和赤皮病等，但其对人类有很大的毒害作用，且代谢较慢，不易排出体外，目前被很多国家禁用，该药残留为我国申报无公害产品或进出口时的必检项目，对于该药的残留目前主要通过气相色谱法完成。但该法衍生化过程复杂，且可导致回收率偏低的因素较多。本文就衍生化中影响回收率的三个重要影响因素进行了系统分析，通过正交试验法对其残留量的衍生化条件进行了优化，得到了氯霉素残留量衍生化的最优条件。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要仪器与设备 气相色谱仪 Agilent 6890N（配63Ni电子捕获检测器）；旋转蒸发仪 BUCHI R-215；离心机 上海安亭TDL-40B；漩涡混合器 德国IKA MS3 DS25；氮吹仪 航川奥盛 KD200。1.1.2 试剂与药品 氯霉素标准品含量99.5%（Sigma C-0378）；乙酸乙酯（色谱纯） ；甲醇（色谱纯） ；氯化钠（分析纯） ； 正己烷（色谱纯） ；三氯甲烷（色谱纯） ；乙腈（色谱纯） ；硅烷化试剂：BSTFA + T CMS （99∶1） （美国Supelco 公司） ；固相萃取小柱（SPE） ： ENVI-18 （3 mL ，美国Supelco 公司）。1.1.3 样品及其制备 用于实验的材料为淡水鲫鱼，去鳞、皮，沿背脊取肌肉；样品切为不大于0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的小块后混匀，放置冰箱中冷冻贮存备用。1.2 方法1.2.1 标准溶液的制备 取氯霉素标准品0025 g，甲醇定容到50 mL，浓度为500 μg/mL，4 ℃冰箱中保存待用。临用前取该贮备液，稀释为0.100 μg/mL的标准工作液。1.2.2 工作曲线的制备 取标准工作液，用甲醇稀释，制备成浓度为0.1、0.5、20、50、100、200、500 μg/mL的标准使用液，分别置于5 mL玻璃离心管中，50 ℃干热尽干，加入100 μL衍生化试剂，70 ℃恒温加热30 min，用氮气吹干多余试剂，用0.5 mL正己烷溶解待用。测定峰高的响应值，以峰高值对质量浓度做工作曲线。1.2.3 色谱条件 色谱柱：DB-5石英毛细管柱，固定相：SE-54（聚甲基苯基乙烯基硅氧烷），30 m×0.53 mm×0.5 μm。载气：氮气，线速度29 cm/s，进样口温度：260 ℃。温度程序：初始柱温150 ℃，维持1 min，15 ℃/min升至260 ℃，维持10 min，然后设定30 ℃/min升至280 ℃，维持5 min，以确保所有的样品已经流出。检测器温度：300 ℃。进样方式及进样量：无分流方式进样，1 μL。检测器：63Ni电子捕获检测器。1.2.4 加标样品的制备 取待测空白样品5 g，加入浓度为0.100 μg/mL的标准溶液1 mL，各样品作2个平行样，根据公式计算得到加标浓度为20 μg/kg。1.2.5 衍生化单因素实验 将冰箱冷冻储存的样品室温解冻，依据水产品行业标准[1]依次进行提取脱脂净化，氮气吹干得到干燥的残留物。接下来进行衍生化的单因素实验，具体单因素及水平见表1，具体操作步骤如下：向干的残留物中加100 μL衍生化试剂，盖塞并旋涡混合10 s，在70 ℃（55 ℃、70 ℃、85 ℃）烘箱中反应30 min（20 min、30 min、40 min）。再在50 ℃（35 ℃、50 ℃、65 ℃）砂浴中用氮气流吹除多余的试剂，至样品管刚好吹干为止。加入0.5 mL正己烷，旋涡混合10 s，供气相色谱分析用。2.2 衍生化温度对氯霉素残留加标回收率的影响三个温度下的气相图谱分别见下图3、4、5，回收率结果见表2。结论：通过根据外标法标准曲线，计算结果显示衍生化温度为60 ℃时回收率最高。2.3 衍生化时间对氯霉素残留加标回收率的影响结论：通过根据外标法标准曲线，计算结果显示衍生化时间为30 min时回收率最高。2.4 衍生化砂浴温度对氯霉素残留加标回收率的影响三个衍生化砂浴温度下的气相图谱分别见下图9、10、11，回收率结果见表4。3 结论正交试验优化得到的最佳衍生化条件是：衍生化温度60 ℃，衍生化时间30 min，砂浴温度45 ℃。根绝R值计算结果可知，R1>R2>R3，所以衍生化温度对于实验结果的影响最大，砂浴温度对于结果影响最小。优化得到的衍生化条件与行业标准相比略有不同。参考文献：[1]SC/T 3018-2004，水产品中氯霉素残留量的测定[s].气相色谱法，北京：中国农业出版社，2004.2（收稿日期：2015-11-09）